Категории

Лабораторная диагностика коклюша и паракоклюша

В Гагаузии обострилась ситуация с полиомиелитом и впервые зафиксировано заболевание коклюшем

Как проводится лабораторная диагностика (анализы) коклюша и паракоклюша?

Коклюш

Коклюш – острая антропонозная инфекционная болезнь с воздушно-капельным механизмом передачи возбудителя, вызываемая коклюшным микробом и характеризующаяся длительным своеобразным спазматическим кашлем с поражением дыхательной, сердечно-сосудистой и нервной систем. Возбудитель коклюша – Bordetella pertussis – грамотрицательная коккобацилла, относится к роду Bordetella. Помимо B. pertussis респираторные инфекции у людей могут вызывать B.parapertussis и B.bronchiseptica.

B.parapertussis вызывает паракоклюш – заболевание, подобное коклюшу, но с более легким течением. Перекрестный иммунитет в отношении коклюша и паракоклюша отсутствует. B.bronchiseptica вызывает бронхисептикоз (бордетеллез), протекающий как ОРВИ, возникающий при контакте с инфицированным животным, у людей с ослабленной иммунной системой может вызывать пневмонию. Выделяют типичные (кашель имеет приступообразный характер) и атипичные (отсутствует спастический кашель) формы коклюша. В течении типичных форм коклюша различают 4 периода: инкубационный (в среднем 14 дней), катаральный (1–2 недели), период спазматического кашля (4–6 недель) и период разрешения. Выраженность клинических проявлений зависит от тяжести заболевания, оцениваемой по: длительности катарального периода, частоте приступов кашля, наличию цианоза лица при кашле, гипоксии вне приступов кашля, степени нарушения работы сердечно-сосудистой системы, наличию и степени выраженности энцефалических расстройств. Диагноз коклюша считается подтвержденным, если имеется соответствие клиническому стандартному определению случая коклюша, лабораторное подтверждение и/или имеется эпидемиологическая связь с лабораторно подтвержденным случаем. Возможно сочетанное инфицирование с другими возбудителями ОРЗ, что отягощает течение болезни.

Показания к обследованию. Диагностика: больные с подозрением на коклюш и паракоклюш (в соответствии со стандартным определением случая*), а также длительно (5–7 дней и более) кашляющих, независимо от указаний на контакт с больными.

По эпидемическим показаниям: дети и взрослые в детских учреждениях, родильных отделениях и детских больницах, в которых были выявлены больные коклюшем.

Дифференциальная диагностика

  • Острые бронхиты, вызванные Mycoplasma pneumoniaeChlamydophila pneumoniae, вирусными возбудителями респираторных инфекций;
  • аспирация инородного тела;
  • муковисцидоз;
  • лимфогранулематоз.

Материал для исследований

  • Заднеглоточный мазок – культуральное исследование;
  • носоглоточный мазок – культуральное исследование;
  • мазки со слизистой носоглотки и ротоглотки – выявление ДНК микроорганизмов;
  • гортанно-глоточные смывы – обнаружение АГ;
  • сыворотка крови – обнаружение АТ.

Этиологическая лабораторная диагностика включает выделение чистой культуры бордетелл и определение их видовой принадлежности; выявление ДНК B.pertussis, B.parapertussis, B.Bronchiseptica методом ПЦР, выявление АГ B. pertussis в гортанно-глоточных смывах с использованием РНИФ; обнаружение специфических АТ.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. При выявлении бордетелл выполняют выделение чистой культуры микроорганизмов и определение их видовой принадлежности методами микроскопии, постановкой РА с видоспецифическими сыворотками, проведением биохимических тестов и оценкой подвижности микроба. Культуральный метод характеризуются большой продолжительностью исследования, его диагностическая чувствительность не превышает 10–20%; аналитические характеристики во многом зависят от качества используемых сред (добавление крови животных является обязательным условием) и реагентов для иммунологических и биохимических идентификационных тестов.

Обнаружение ДНК методом ПЦР наиболее эффективно и востребовано для ранней диагностики, наибольшими диагностическими возможностями обладают методики, позволяющие обнаруживать и дифференцировать значимые для человека виды Bordetella с чувствительностью 5 x 102 – 1 x 103 ГЭ/мл исследуемого материала со специфичностью 100%.

Выявление АТ позволяет диагностировать коклюш на поздних сроках. Обнаружение специфических АТ проводят с использованием: РА для диагностики коклюша и паракоклюша, ИФА для обнаружения АТ (Ig M, A, G) к различным антигенам B.pertussis и B.parapertussis. Выявление специфических IgА методом РНИФ практически не используется по причине отсутствия стандартизации; чувствительность анализа, по данным авторов метода, варьирует в широком диапазоне от 103 до 105 микробных клеток в 1 мл, при этом положительные результаты исследования можно учитывать только при наличии типичной симптоматики коклюша.

Показания к применению различных лабораторных исследований. Культуральное исследование с диагностической целью следует проводить в ранние сроки заболевания (1–2 недели болезни); в более поздние сроки высеваемость возбудителя резко снижается. Оптимальное время для обнаружения ДНК методом ПЦР – до 3-х недель от начала заболевания. Определение АТ целесообразно с 3-й по 6-ю недели от начала заболевания, далее титры АТ начинают снижаться. У детей до 6 лет, вакцинированных против коклюша, можно использовать только пробы крови, взятые в динамике (парные сыворотки), причем первый раз кровь берется не ранее чем через 3 недели от начала заболевания, повторно – спустя 2 недели.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Диагноз коклюша считается лабораторно подтвержденным в случае выделения культуры B.pertussis; обнаружения специфического фрагмента генома B.pertussis методом ПЦР; выраженной сероконверсии (увеличение в 4 и более раз уровня специфических IgG и/или IgA в парных сыворотках, или обнаружении у не привитого пациента специфических IgM). Диагностическим титром реакции агглютинации у не привитых и не болевших детей считают разведение 1:80. Необходимо учитывать, что у детей в возрасте до 3 месяцев могут присутствовать материнские АТ, но, как правило, в низких титрах. Диагноз коклюш, вызванный B.parapertussis, ставится в случае выделения культуры B.parapertussis или обнаружения специфического фрагмента генома B.parapertussis методом ПЦР, или при обнаружении АТ методом РА в титре не менее 1:80. Заболевание, вызванное B.bronchiseptica, диагностируется при выделении культуры или обнаружения специфического фрагмента генома методом ПЦР.


* Стандартное определение случая заболевания коклюшем – острое заболевание, характеризующееся: сухим кашлем с постепенным его усилением и приобретением характера приступообразного спазматического на 2-3 неделе заболевания, особенно в ночное время суток или после физической и эмоциональной нагрузки; явлениями апноэ, гиперемией лица, цианозом, слезотечением, рвотой, лейко- и лимфоцитозом в периферической крови, развитием «коклюшного легкого», жестким дыханием, отделением вязкой мокроты; незначительным повышением температуры.

Источник: https://www.cmd-online.ru/vracham/spravochnik-vracha/koklyush/

/ Тема 36. Возбудители коклюша и паракоклюша

Характерные приступы судорожного кашля с протяжными выдохами не всегда присутствуют у детей, получивших прививки, например, АКДС. Поэтому врачи и родители рассчитывают, что анализ на коклюш расставит все точки над «и». Заразная болезнь особенно тяжело протекает у детей первого года жизни. Инкубационный период составляет в среднем 1–2 недели, начальные симптомы напоминают ОРВИ.

Содержание статьи

Биологические особенности бактерий, вызывающих коклюш и паракоклюш

Род Bordetella объединяет 9 видов бактерий, из которых сильными патогенными свойствами обладают B. pertussis и B. parapertussis — соответственно возбудитель коклюша и паракоклюша (коклюшеподобной инфекции). Это грамотрицательные, аэробные коккобациллы. Патогенные свойства B. pertussis связаны с выделением коклюшного токсина белковой природы. Токсичные вещества бактерий в инактивированной форме включают в состав коклюшных вакцин.

Оптимальная температура выращивания культуры бордетеллы при бактериологическом посеве составляет 35°C. Возбудитель коклюша размножается на специальной среде картофельно-глицеринового либо казеиново-угольного агара. Через несколько дней возникают колонии, имеющие выпуклую форму, с серебристой поверхностью. По мере хранения выделенных штаммов проявляется изменчивость, прежде всего, меняются иммуногенные свойства возбудителя.

В каких случаях назначают лабораторные исследования

Перед тем, как сдавать анализ на коклюш, необходимо учесть, что симптомы интоксикации не проявляются сразу же после заражения. Затем усиливается ночью и по утрам приступообразный кашель. Лицо больного ребенка краснеет, периодически возникают характерные для коклюша вдохи. Завершается такой приступ отхождением вязкой мокроты либо рвотой.

Периодичность течения заболевания

Названия периодаПродолжительностьПризнаки и симптомы
ИнкубационныйОт дней до 14 суток (в среднем — одна неделя)-
ПредсудорожныйОт трех дней до двух недельСухой навязчивый кашель. Температура нормальная
Судорожный От двух недель до двух месяцев и болееХарактерные шумные вдохи во время судорожного кашля. Отхождение мокроты или рвота после приступа
Обратное развитиеОт двух недель до двух месяцевКашель становится редким. Самочувствие ребенка улучшается
Поздняя реконвалесценция
(выздоровление)
От двух до шести месяцевПриступообразный кашель возникает только при нагрузках, волнении, других заболеваниях

Лабораторный посев и ПЦР-исследование обычно назначают в предсудорожном периоде, когда еще нет специфических вдохов при кашле. Учитываются при этом такие диагностические признаки коклюша, как непосредственные контакты с больным человеком в детском саду, школе или семье. Врач, направляя ребенка на бактериологический посев и ПЦР, также смотрит на результаты общего анализа крови.

Лабораторная диагностика коклюшной инфекции у детей

Врачи выбирают алгоритм исследования в зависимости от возраста маленького пациента, длительности проявления симптомов заболевания, вакцинального статуса. Основной метод лабораторной диагностики — бактериологический анализ на коклюш и паракоклюш. Флюорографию назначают для исключения заболевания с похожими симптомами (острый бронхит, воспаление легких, плеврит).

Специалист в первую очередь обращает внимание на клиническую картину при осмотре ребенка, опрашивает родителей. Врач назначает исследования, способные подтвердить диагноз, при отсутствии явных симптомов заболевания. Ценный материал для педиатра дает результат анализа на коклюш в «Инвитро» (диагностическом центре). Высокий уровень лабораторной диагностики позволят определить степень тяжести заболевания, выявить осложнения инфекции.

От правильного определения примерного срока инфицирования зависит выбор специалистами лабораторных тестов.

Какие анализы сдавать для диагностики возбудителя коклюша и паракоклюшной инфекции

  1. Мазок из глотки — позволяет выделить культуру бактерий с помощью микробиологического посева.
  2. Иммуноферментный анализ крови — метод ИФА для определения антигенов и антител.
  3. Полимеразная цепная реакция — тест ПЦР для выделения ДНК возбудителя.

Примерная схема лабораторной диагностики коклюша и паракоклюша

Методы1–2 недели от начала заболевания3–4 неделиСвыше 4 недель
КатегорииБез лечения антибиотикомНа фоне антибиотикаБез лечения антибиотикомНа фоне антибиотикаБез лечения/с лечением
Непривитые
дети до 1 года
Бак. посев, метод ПЦРПЦРБак. посев, метод ПЦРПЦР, серологияСерология
Непривитые дети старше 1 годаБак. посев, метод ПЦРПЦРПЦР, серология,
бак. посев
СерологияСерология
Привитые дети, подросткиМетод ПЦР, бак. посевПЦРПЦР, серологияСерологияСерология

Получение результата бактериального посева занимает несколько дней. Между тем, экспресс-тест ПЦР дает возможность расшифровать диагноз спустя всего несколько часов. Информативность вышеперечисленных методов диагностики выше у невакцинированных детей. После четырех недель прямые тесты уже не столь эффективны для выделения и определения возбудителя коклюша. Серология позволяет уточнить картину в поздние периоды заболевания даже у ранее вакцинированных детей.

Бактериологическое исследование

Медперсонал берет мазок у детей с задней стенки глотки, далее высевает на питательную смесь в специальных лабораторных емкостях, где происходит развитие микробов в течение нескольких дней. Готовый материал тщательно изучается под микроскопом, чтобы выделить колонии B. pertussis или B. parapertussis. Бактериологическое исследование рассчитано на то, что в начале заболевания бактерии находятся в глотке и носовой полости.

Бактериологический посев считается «золотым стандартом» диагностики коклюшной инфекции у детей.

Микробиологический посев с последующим микроскопическим исследованием при коклюше позволяет диагностировать либо исключить инфекцию. Если результаты анализа положительные, то необходимо начать адекватное лечение и профилактику осложнений. Однако бактериологическое исследование малодостоверно на фоне терапии антибактериальными средствами.

Забор материала тампоном из глотки доставляет незначительный дискомфорт взрослому, но малыши обычно сопротивляются и капризничают. Для такого случая предусмотрен вариант забора слизи для исследования из носа. Перед тем, как сдать анализ, рекомендуется не полоскать горло, не чистить зубы, не закапывать лекарства в нос. Необходимо, чтобы в глотке и в носовой полости накопилась мокрота с возбудителем заболевания.

ПЦР и серология при коклюше

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — исследование бактериальной ДНК. Метод ПЦР позволяет диагностировать коклюш на молекулярно-генетическом уровне. Биологический материал получают при заборе мокроты больного коклюшем. Метод полимеразной цепной реакции часто используют при отрицательных результатах бактериологического исследования.

Лабораторный иммуноферментный анализ подходит для периода заболевания, когда в организме уже вырабатываются антитела. Методика ИФА основывается на качественном определении антигенов и специфических антител в кровяной плазме. Наличие иммуноглобулинов М характерно для самого заболевания, а иммуноглобулины G циркулируют в крови уже после перенесенной инфекции.

Если антител к антигенам возбудителя в анализе крови на коклюш не обнаружат, то ребенок не болен и не перенес инфекцию ранее.

Серологический тест может назначаться для ретроспективной диагностики коклюша, выявления очага инфекции и предупреждения ее распространения. Расшифровка результата покажет в крови больных и переболевших детей повышение уровней специфических иммуноглобулинов М и G к токсинам бактерий Bordetella.

Общий анализ крови при коклюше указывает на наличие либо отсутствие воспалительного процесса в организме ребенка. Заболевание коклюшем можно заподозрить при повышенном количестве лимфоцитов и лейкоцитов, при этом показатели СОЭ будут в норме. Врачи рекомендуют сдавать кровь на анализ в утренние часы, перед завтраком.

Лечение коклюша в РФ включено в программу ОМС, в государственных медучреждениях проводят все необходимые мероприятия. Альтернативная возможность обследования — обращение в диагностические центры «Инвитро». Врач-консультант лаборатории объяснит назначение каждого анализа, даст его подробную расшифровку.

Источник: http://ZdorovyeDetei.ru/infekcii/kak-provoditsya-laboratornaya-diagnostika-analizy-koklyusha-i-parakoklyusha.html

МР 3.1.2.0072-13 Диагностика коклюша и паракоклюша


MP 3.1.2.0072-13



Дата введения: с момента утверждения

1. Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Е.Б.Ежлова, А.А.Мельникова, Н.А.Кошкина); Федеральным бюджетным учреждением науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Пастера" (Г.Я.Ценева, Н.Н.Курова); Федеральным бюджетным учреждением науки "Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (С.Б.Яцышина, Т.С.Селезнева, М.Н.Прадед); Федеральным государственным бюджетным учреждением "Научно-исследовательский институт детских инфекций Федерального медико-биологического агентства" (Ю.В.Лобзин, И.В.Бабаченко).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 24 мая 2013 г.

3. Введены в действие с момента утверждения.

Термины и сокращения


АКДС - адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина

ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения

ГОСТ - Государственный стандарт

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИФА - иммуноферментный анализ

КУА - казеиново-угольный агар

ME - международные единицы

МУ - методические указания

ОРВИ - острая респираторная вирусная инфекция

ПСК - период судорожного кашля

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РА - реакция агглютинации

РИФ - реакция иммунофлуоресценции

РНК - рибонуклеиновая кислота

СанПиН - санитарно-эпидемиологические правила и нормы

СОЭ - скорость оседания эритроцитов

СП - санитарно-эпидемиологические правила

ТЕ - буфер Трис-ЭДТА

ТУ - технические условия

ФС - фармакопейная статья

цАМФ - циклический аденозинмонофосфат

ELISA - enzyme-linked immunosorbent assay (разновидность ИФА)

Ig - иммуноглобулин

IL - интерлейкин

FHA - filamentous haemagglutinin (филаментозный гемагглютинин)

NASBA - nucleic acid sequence-based amplification (метод амплификации РНК)

PT - pertussis toxin (коклюшный токсин)

RS-инфекция - инфекция, вызванная респираторно-синцитиальным вирусом

1. Область применения


В методических рекомендациях представлена современная микробиологическая характеристика коклюша в условиях массовой вакцинопрофилактики. В них содержится краткое описание рода Bordetella, включая новые виды, открытые в последнее десятилетие, более детальная характеристика биологических свойств В. pertussis, В. parapertussis и В. bronchiseptica, описание бактериологического метода исследования с использованием приемов, повышающих его информативность, современных методов лабораторной диагностики ПЦР и ИФА. Представлены алгоритмы диагностики коклюша в зависимости от вакцинального статуса, возраста и сроков заболевания пациентов. Цель настоящих методических рекомендаций - унифицировать подходы к лабораторной диагностике коклюшной инфекции.

Методические рекомендации предназначены для специалистов органов и организаций Роспотребнадзора (микробиологов, эпидемиологов), специалистов по клинической лабораторной диагностике, инфекционистов, педиатров, семейных врачей и врачей общей практики.

2. Введение


В довакцинальную эру коклюш занимал второе место среди детских капельных инфекций по уровню заболеваемости и первое по уровню смертности. В настоящее время в мире ежегодно заболевает несколько миллионов человек, умирает около 200 тыс. (в 2008 г. - 16 млн заболевших, 195 тыс. смертей).

Специфическая профилактика коклюша, проводимая в нашей стране с 1959 года, отчетливо повлияла на эпидемический процесс, биологические свойства возбудителя и клинику. Этапы массовой иммунизации характеризовались различным уровнем охвата детей прививками против коклюша и, в соответствии с этим, менялась эпидемиологическая обстановка. Низкий уровень иммунизации в 90-е годы привел к росту заболеваемости коклюшем. Достижение охвата прививками детей первого года жизни (более 95%) в последующие годы и поддержание его на этом уровне обеспечило не только снижение заболеваемости коклюшем, но и с 2001 г. стабилизацию показателей на минимальном уровне (3,2-5,7 на 100 тыс. населения). Особенностью эпидемического процесса коклюша на фоне высокого охвата прививками детей раннего возраста является возникновение периодических подъемов. Это объясняется недостаточной напряженностью и длительностью поствакцинального иммунитета, создаваемого в условиях нередкого нарушения календаря прививок, в частности, несоблюдения сроков вакцинации и интервалов между введениями доз вакцины и проведением ревакцинации, что способствует накоплению значительного числа неиммунных лиц. Увеличение охвата прививками привело в настоящее время к изменению возрастной структуры лиц, заболевших коклюшем. Большинство заболевших составляют школьники 7-14 лет - до 50,0%, дети 3-6 лет - до 25,0%, наименьшую долю - дети в возрасте 1-2 лет - 11,0% и дети до 1 года - 14,0%. В периоды подъема заболеваемости коклюшем интенсивность эпидемического процесса определяется заболеваемостью детей школьного возраста. Темпы роста в этой группе увеличиваются в 2-3 раза. Из числа лиц, заболевших коклюшем, 65% составляют привитые.

Поствакцинальный иммунитет не предохраняет от заболевания. Коклюш в этих случаях протекает в виде легких и стертых форм инфекции, которые диагностируются, в основном, ретроспективно (серологически). После перенесенного заболевания остается более длительный иммунитет.

Истинная заболеваемость коклюшем значительно выше за счет недиагностированной коклюшной инфекции (легких и стертых клинических форм). Трудности клинической диагностики коклюша на ранних стадиях заболевания, отсутствие обследования всех длительно (свыше 7 дней) кашляющих или его проведение на поздних сроках заболевания, а также после продолжительного лечения антибактериальными препаратами приводит к низкому проценту выявляемости возбудителя инфекции. Уровень бактериологического подтверждения диагноза составляет 10-20%. Современные методы исследования позволяют проводить раннюю диагностику заболевания (ПЦР) и существенно облегчают постановку диагноза (ПЦР, ИФА).

Таким образом, коклюш в нашей стране требует пристального внимания со стороны врачей различных специальностей. Своевременная и качественная лабораторная диагностика коклюшной инфекции позволит избежать ошибок в постановке диагноза и будет способствовать эффективной терапии.

3. Характеристика рода Bordetella, биологические свойства возбудителей коклюша и паракоклюша

________________
* Слово "Bordetella" в наименовании раздела 3 в бумажном оригинале выделено курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.

Род Bordetella относится к семейству Alcaligenaceae и включает 9 видов: В.ansorpii, В. avium, В. bronchiseptica, В. hinzii, В. holmesii, В. parapertussis, В. pertussis, В.petrii, В. trematum. Первой (в 1908 г.) была описана В. pertussis, бактерия патогенна для человека и является возбудителем коклюша. В. parapertussis была описана в 1938 г., вызывает у людей паракоклюш (коклюшеподобное заболевание), она также была выделена от овец. В. bronchiseptica была описана в 1911 г., является возбудителем заболеваний дыхательных путей у многих млекопитающих (кашля у собак, атрофического ринита у свиней и др.), но встречается также бессимптомное носительство. У человека редко вызывает заболевание, однако описаны случаи, когда у пожилых людей, заразившихся от домашних животных (кроликов), В. bronchiseptica вызывала длительный кашель. В. avium описана в 1984 г., является возбудителем ринотрахеита у птиц. Описано несколько случаев выделения B. avium от пожилых пациентов с отягощенным анамнезом, с клинической картиной пневмонии. В 1995 г. были описаны сразу два новых вида: В. hinzii и В. holmesii. В. hinzii колонизирует дыхательные пути домашней птицы, была выделена от иммуноскомпрометированных пациентов, описан случай летальной септицемии. В. holmesii выделялась только от людей, обнаруживалась в мокроте, несколько раз в крови, этиологическая роль в развитии инфекций не доказана. В 1996 г. выделена В. trematum, возбудитель вызывает раневые и ушные инфекции. В 2001 г. была описана В. petrii, единственный представитель рода, выделенный из окружающей среды и способный жить в анаэробных условиях. В 2005 г. была выделена В. ansorpii, описано несколько случаев выделения от пациентов с онкологическими заболеваниями (из гнойного содержимого эпидермальной кисты, из крови).

Морфологические и культуральные свойства

Бактерии рода Bordetellae - мелкие (0,2-0,5 мкм0,5-2,0 мкм) грамотрицательные коккобациллы. В мазках - часто биполярно окрашенные, одиночные или в парах, реже в цепочках, имеют нежную капсулу. Все, за исключением В. petrii, - строгие аэробы. Температура выращивания бордетелл +35-37 °С (оптимально +35 °С). Бордетеллы требовательны к условиям роста: 130-150 мг %аминного азота, кровь, дрожжевой экстракт, никотиновая кислота, аминокислоты (цистин, пролин, метионин, серин, глютамин и др.); наиболее требователен возбудитель коклюша, он растет только на специальных средах, в то время как остальные представители рода растут на кровяном агаре. Классической средой для первичного выделения В. pertussis является среда Борде-Жангу (картофельно-глицериновый агар), позднее были предложены синтетические и полусинтетические среды, в частности, казеиново-угольный агар (КУА). На указанных средах бордетеллы вырастают в виде характерных колоний: на среде Борде-Жангу - выпуклые, гладкие, блестящие, серебряного цвета, напоминающие капли ртути, окруженные зоной гемолиза; на КУА - выпуклые, гладкие, серого цвета с жемчужным, желтоватым или беловатым оттенком. Колонии маслянистые, легко снимаются петлей. В. parapertussis и В. holmesii за счет образования пигмента вызывают потемнение сред с кровью, образуют бурую подложку.

Таблица 1


Ростовые характеристики основных видов бордетелл

В. pertussis

В. parapertussis

В. bronchiseptica

Время, необходимое для появления колоний (сут):

- на КУА (бордетелагар)

2-3

1-2

18-24 ч

- на среде Борде-Жангу

3-6

2-3

1-2

Размер колоний на КУА

1-2 мм

2-3 мм

4 мм

Рост на простом агаре

-

+

+



Устойчивость: возбудители коклюша и паракоклюша - облигатные паразиты, нестойкие. Погибают при прогревании до 50 °С за 30 мин, при обработке дезинфицирующими растворами. Во внешней среде не сохраняются. Устойчивы ко многим антибиотикам.

Биохимические свойства

Основные биохимические свойства бордетелл, которые используются в практической работе при изучении выделенных культур, представлены в табл.2.

Таблица 2


Дифференцирующие признаки видов родаBordetella

Рост на кровяном агаре

Оксидаза

Уреаза

Тирози-
наза

Восста-
новление нитратов

Утилиза-
ция цитратов

Подвиж-
ность

В. pertussis

-

+

-

-

-

-

-

В. parapertussis

+

-

+

+

-

-

-

В. bronchiseptica

+

+

+*

-

+

+

+

В. avium

+

+

-

-

-

+

+

В. hinzii

+

+

±

-

-

+

+

В. holmesii

+

-

-

+

-

-

-

В. trematum

+

-

-

-

±

-

+

В. petrii

+

+

-

-

-

+

-

В. ansorpii

+

-

-

-

-

+

+

* - через 4 часа

В. pertussis наименее активна ферментативно (положительный тест на оксидазу). В. parapertussis вырабатывает ферменты тирозиназу и уреазу и не образует оксидазы. Тирозиназа катализирует продукцию пигментов из тирозина, содержащегося в питательных средах, что вызывает их потемнение. Наиболее активна В. bronchiseptica: вырабатывает уреазу, оксидазу, утилизирует цитраты, восстанавливает нитраты до нитритов.

Антигенное строение и серологическая характеристика

К факторам патогенности В. pertussis в первую очередь относят коклюшный токсин. Это экзотоксин, белок с молекулярной массой 117000 Да, состоящий из двух функциональных частей (А и В) и пяти структурных субъединиц (S1-S5): фрагмент А (соответствует субъединице S1) - обладает ферментативной активностью, ингибирует клеточную аденилатциклазу. Участок В (состоит из субъединиц S2-S5) отвечает за присоединение токсина к рецепторам клеток-мишеней. Токсин обладает высокой иммуногенностью, в инактивированной форме включен в состав всех бесклеточных коклюшных вакцин. Определение антител к коклюшному токсину методом ИФА применяется для диагностики коклюша и контроля эффективности вакцинации.

Филаментозный гемагглютинин - поверхностный белок, участвующий в адгезии, обладает протективными свойствами. Включен в состав бесклеточных коклюшных вакцин. В ряде коммерческих ИФА-тест-систем для диагностики коклюша предлагается определять уровень антител различных классов к антигенному комплексу, в состав которого входят гемагглютинин и коклюшный токсин. В отличие от токсина, гемагглютинин не является строго специфичным для В. pertussis, присутствует также у В. parapertussis, может давать перекрестные реакции с Н. influenzae, С. pneumoniae и рядом других бактерий.

Пертактин - белок наружной мембраны, относится к системе адгезинов, продуцируемых бактериями при попадании в человеческий организм. Обладает протективными свойствами, входит в состав ряда бесклеточных коклюшных вакцин.

Аденилатциклаза-гемолизин - это комплекс экзофермента аденилатциклазы, которая при попадании в клетки катализирует образование цАМФ, с токсином - гемолизином. Токсин - основной фактор патогенности, действующий на начальном этапе инфекции, кроме того, с ним связывают протективные свойства комплекса.

Агглютиногены - поверхностные белки, ответственные за выработку агглютинирующих антител. У бордетелл выделено 16 агглютиногенов (табл.3).

Таблица 3


Агглютиногены бордетелл

Общеродовой

Видовые

Внутривидовые (штаммовые)

В. pertussis

7

1

1, 2, 3, 4, 5, 6, 13, 15, 16

В. parapertussis

14

8, 9, 10

В. bronchiseptica

12

8, 9, 10, 11



В зависимости от наличия в бактериальной клетке агглютиногенов 2 и 3 выделяют четыре серотипа В. pertussis: 1.2.0; 1.0.3; 1.2.3; 1.0.0. Понятие об агглютиногенах тесно связано с фимбриями (Fim). В геноме всех В. pertussis присутствуют и , то есть теоретически любой штамм может продуцировать агглютиногены 2 и/или 3. Фимбрии включены в состав некоторых бесклеточных коклюшных вакцин. Серотипирование В. pertussis в отечественной практике основано на агглютинации бактериальных клеток монофакторными сыворотками, т.е. антителами к агглютиногенам, в реакции агглютинации (РА) на стекле, а в зарубежной практике - на агглютинации бактериальных клеток моноклональными антителами к фимбриальным антигенам в реакции агглютинации в микропланшете. Для диагностики коклюша в России до настоящего времени используется РА с цельноклеточным диагностикумом, в которой определяются агглютинирующие антитела, в первую очередь, к агглютиногенам:

липополисахарид: в его состав входят два липида: А и X. С Х-фракцией связана биологическая активность липополисахарида. Он обладает множественными функциями, в том числе выраженной иммуногенностью; с ним связывают реактогенность клеточной вакцины;

трахеальный цитотоксин - фрагмент пептидогликана клеточной стенки. Обладает разнообразными биологическими свойствами: пирогенность, адъювантность, артритогенность, стимуляция продукции IL-1. In vitro токсин поражает трахеальные эпителиальные клетки и вызывает цилиостаз. При этом нарушается мукоцилиарный клиренс - первая линия защиты, и создаются условия для персистирования инфекции;

дермонекротизирующий токсин обладает вазоконстрикторной активностью, у экспериментальных животных вызывает снижение прироста массы тела, атрофию селезенки, ишемические повреждения или некроз кожи. Его роль в заболевании не ясна.

Все вышеперечисленные факторы присутствуют у свежевыделенных штаммов коклюшного микроба. Однако при хранении на искусственных питательных средах проявляется изменчивость возбудителя. Установлено, что в процессе сапрофитизации коклюшный микроб проходит четыре фазы: свежевыделенный микроб (гладкий штамм), обладающий высокими вирулентными и иммуногенными свойствами, относится к первой фазе. По мере перехода к четвертой фазе постепенно утрачивается иммуногенность, вирулентность, меняются культурально-биологические свойства.

4. Показания к обследованию


Коклюш - заболевание, продолжающееся минимум две недели, без явлений интоксикации и повышения температуры тела, протекающее с приступообразным кашлем, усиливающимся ночью и по утрам, сопровождающимся покраснением лица, шумными вдохами (репризами), заканчивающимся отхождением вязкой слизи или рвотой в конце приступа кашля.

Лабораторно подтвержденный случай (см. п.5.1).

Эпидемиологически связанный случай: случай, при котором пациент имел (имеет) контакт с одним и более больными коклюшем при условии, что хотя бы один случай в цепи передач был подтвержден лабораторно.

Вероятный случай: отвечает клиническому определению случая, лабораторно не подтвержден и не имеет эпидемиологической связи с лабораторно подтвержденным случаем.

Подтвержденный случай: отвечает клиническому определению случая, лабораторно подтвержден и/или имеет эпидемиологическую связь с лабораторно подтвержденным случаем.

Заболевание протекает циклично со сменой ряда периодов.

Инкубационный период продолжается от 3 до 14 дней (в среднем 7-8 дней).

Предсудорожный период - от 3 до 14 дней, проявляется сухим навязчивым кашлем на фоне нормальной температуры тела.

Период судорожного кашля (ПСК) - от 2-3 до 6-8 недель и более, характеризуется типичными приступами судорожного кашля, часто сопровождаемого репризами и отхождением мокроты или рвотой после кашля.

Период обратного развития (ранней реконвалесценции) - от 2 до 8 недель, на фоне улучшения самочувствия ребенка кашель становится реже и постепенно теряет типичный характер.

Период реконвалесценции (поздней) - от 2 до 6 месяцев, характеризуется состоянием гиперреактивности с возможным развитием приступообразного кашля при интеркуррентных заболеваниях или эмоциональных нагрузках.

4.1. Показания к обследованию на коклюш в предсудорожном периоде


В предсудорожном периоде обязательно лабораторное подтверждение диагноза методами выявления возбудителя (бактериологическим, ПЦР).

Опорно-диагностические признаки коклюша в предсудорожном периоде:

контакт с больным коклюшем или длительно кашляющим ребенком (взрослым) в семье или детском учреждении;

постепенное начало при удовлетворительном состоянии и хорошем самочувствии больного;

нормальная температура тела;

сухой навязчивый постепенно усиливающийся кашель;

отсутствие или слабая выраженность других катаральных явлений, кроме кашля;

отсутствие патологических аускультативных и перкуторных изменений в легких;

отсутствие эффекта от проводимой симптоматической терапии;

появление типичных гематологических изменений - лейкоцитоза с лимфоцитозом (или изолированного лимфоцитоза) при нормальной СОЭ.

4.2. Показания к обследованию на коклюш в периоде судорожного кашля


Диагноз ставится на основании клинико-эпидемиологических и гематологических данных, подтверждается лабораторными методами выявления возбудителя и/или специфических антител.

Основным симптомом этого периода является приступообразный судорожный (спазматический) кашель. Приступ кашля представляет следующие друг за другом дыхательные толчки на выдохе, прерываемые свистящим судорожным вдохом - репризом, возникающим при прохождении воздуха через суженную (вследствие ларингоспазма) голосовую щель. Заканчивается приступ отхождением вязкой, стекловидной мокроты или рвотой. Приступу может предшествовать аура (чувство страха, беспокойство, чихание, першение в горле и др.). Приступы кашля могут быть кратковременными или продолжаться 2-4 мин. Возможны пароксизмы - концентрация приступов кашля на коротком отрезке времени. При типичном приступе кашля характерен вид больного: лицо краснеет, затем синеет, становится напряженным, набухают кожные вены шеи, лица, головы; отмечается слезотечение. Язык высовывается из ротовой полости до предела, кончик его поднимается кверху. В результате трения уздечки языка о зубы и ее механического перерастяжения происходит надрыв или образование язвочки. Надрыв или язвочка уздечки языка - патогномоничный симптом коклюша. При гладком течении заболевания температура тела остается нормальной.

Характерно постепенное развитие симптомов заболевания с максимальным учащением и утяжелением приступов судорожного кашля на 2 неделе ПСК; присоединением специфических осложнений на 3 неделе, неспецифических осложнений на фоне развития вторичного иммунодефицитного состояния - на 4 неделе ПСК.

Опорно-диагностические признаки коклюша в периоде судорожного кашля:

характерный эпидемиологический анамнез;

приступообразный судорожный кашель - патогномоничный симптом;

характерная динамика кашля от сухого навязчивого до приступообразного судорожного;

характерный внешний вид больного (пастозность век, одутловатость лица);

нормальная температура тела при гладком течении заболевания;

обилие крупно- и среднепузырчатых влажных хрипов в легких, уменьшающихся или исчезающих после приступа кашля;

возможны надрыв или язвочка уздечки языка - патогномоничный симптом.

Критерии тяжести коклюша:

выраженность симптомов кислородной недостаточности (гипоксии);

частота и характер приступов судорожного кашля;

наличие рвоты после судорожного кашля;

состояние ребенка в межприступном периоде;

выраженность отечного синдрома;

наличие и сроки развития специфических осложнений;

выраженность гематологических изменений.

Таблица 4


Характеристика коклюша по формам тяжести

Признаки

Форма тяжести

легкая

среднетяжелая

тяжелая

гипоксия

нет

цианоз носогубного треугольника

цианоз лица

длительность предсудорожного периода

7-14 дней

7-10 дней

3-5 дней

частота приступов

до 10 в сутки;
репризы редко

10-20 в сутки;
репризы часто

более 20 в сутки;
пароксизмы

рвота после кашля

нет

характерна

возможна

Источник: http://docs.cntd.ru/document/464675125
Возможно вас заинтересует: